PCR makina|Kodi mukumvetsa?

Ukadaulo wa PCR wopambana Mphotho ya Nobel

Mu 1993, wasayansi waku America Mulis adalandira Mphotho ya Nobel mu Chemistry, ndipo zomwe adachita zinali kupangidwa kwaukadaulo wa PCR.Matsenga aukadaulo wa PCR ali m'makhalidwe otsatirawa: Choyamba, kuchuluka kwa DNA koyenera kukulitsidwa kumakhala kochepa kwambiri, ndipo mongoyerekeza molekyu imodzi ingagwiritsidwe ntchito kukulitsa;chachiwiri, mphamvu yokulitsa ndiyokwera kwambiri, ndipo kuchuluka kwa jini yomwe mukufuna ndikuwonjezera.Kukulitsa, nthawi zopitilira 10 miliyoni m'maola ochepa.Tsopano chida cha PCR chakhala chikugwiritsidwa ntchito kwambiri pa kafukufuku wa sayansi ya moyo ndi zina zambiri.

Mitundu yosiyanasiyana ndi opanga ma cyclers otentha amatha kuwonetsa magwiridwe antchito komanso kubwereza.Kusiyana kumeneku kumakhudza osati kugwira ntchito kwa PCR kokha komanso kulondola ndi kusasinthasintha kwa deta yomwe yapezedwa.Kumvetsetsa za makina a PCR kungatithandize kukulitsa kupambana kwathu pakuyesa kwathu.

Kutentha module

Kulondola kwa kutentha kwa woyendetsa matenthedwe kumatha kukhala kotsimikizika pakupambana kapena kulephera kwa PCR.Kusasinthasintha kwa kutentha kwabwino pa chotenthetsera ndikofunikiranso kuti mupeze zotsatira zodalirika komanso zobwereketsa za PCR.

Njira imodzi yowonetsetsera kulondola kwa kutentha ndikuyesa pafupipafupi kugwiritsa ntchito zida zotsimikizira kutentha ndikukonzanso momwe angafunikire akatswiri ophunzitsidwa bwino.Mayeso otsimikizira kutentha amagwiritsidwa ntchito:

Kulondola kwabwinoko potengera kutentha kwa isothermal

Kulondola kwabwinoko potengera kutentha pambuyo pa kutembenuka kwa kutentha

Kulondola kwa Kutentha kwa Chivundikiro cha Kutentha

Primer Annealing Temperature Control

Kuwongolera kutentha kwa gradient ndi ntchito ya chida cha PCR chomwe chimathandizira kukhathamiritsa kwa primer annealing mu PCR.Cholinga cha kusintha kwa gradient ndikukwaniritsa kutentha kosiyanasiyana pakati pa ma modules, ndi ≥2 ° C kukwera ndi kutsika pakati pa chigawo chilichonse, kutentha kosiyana kumatha kuyesedwa nthawi imodzi kuti mupeze kutentha koyenera kwa primer annealing.Mwachidziwitso, gradient yowona imakwaniritsa kutentha kwa mzere pakati pa ma module.

Komabe, ma cyclers wamba a gradient thermal cyclers nthawi zambiri amagwiritsa ntchito chipika chimodzi chotenthetsera ndikuwongolera kutentha kudzera muzinthu ziwiri zotenthetsera ndi kuziziritsa zomwe zili mbali zonse ziwiri, zomwe zimabweretsa zoperewera zotsatirazi:

Kutentha kuwiri kokha kungakhazikitsidwe: kutentha kwapamwamba ndi kotsika kwa primer annealing kumayikidwa kumapeto kwa gawo la matenthedwe, ndipo kukhazikika kwa kutentha kwina sikungatheke pakati pa modul.

Chifukwa cha kusinthana kwa kutentha pakati pa mizati yosiyanasiyana, kutentha pakati pa madera osiyanasiyana pa module kumakhala kosavuta kutsatira sigmoidal curve kusiyana ndi mzere weniweni.

Kutentha kwachitsanzo

Kuthekera kwa woyendetsa matenthedwe kuwongolera kutentha kwachitsanzo ndikofunikira kwambiri pakulondola kwa zotsatira za PCR.Zosintha zokhudzana ndi zida monga ma rampu, nthawi yogwira, ndi ma aligorivimu ndizofunikira pakulosera kutentha kwachitsanzo.

Kuchuluka kwa kutentha ndi kuzizira kwa makina a PCR kumatanthauza kuti kutentha kumasintha pakati pa masitepe a PCR omwe amachitika pakapita nthawi.Popeza zimatengera nthawi yochuluka kuti kutentha kusamuke kuchokera ku module kupita ku chitsanzo, kutentha kwenikweni ndi kuzizira kwachitsanzo kudzakhala pang'onopang'ono.Choncho, tanthauzo la liwiro la kusintha kwa kutentha liyenera kusiyanitsa ndi kumvetsetsa.

Mlingo wapamwamba kwambiri kapena wapamwamba kwambiri umayimira kusintha kwachangu kwa kutentha komwe module ingathe kukwaniritsa pakanthawi kochepa kwambiri panjira.

Wapakati chipika ramp mlingo amaimira mlingo wa kutentha kusintha kwa nthawi yaitali ndipo adzapereka muyeso woimira kwambiri PCR makina liwiro.

Kutentha kwakukulu kwachitsanzo ndi kuzizira ndi kutentha kwachitsanzo ndi kuzizira kumawonetsa kutentha kwenikweni komwe kunapezedwa ndi chitsanzo.Kutentha kwachitsanzo ndi kuziziritsa kudzapereka kufananitsa kolondola kwa makina a PCR ndi momwe angakhudzire zotsatira za PCR.

Mukasintha ma cycler m'malo, tikulimbikitsidwa kugwiritsa ntchito chida chokhala ndi ramp rate pulogalamu yomwe imatengera mawonekedwe am'mbuyomu kuti musinthe mosavuta komanso kukhudza kubwereza kwa PCR.

Thermal cycler iyenera kupangidwa kuti igwirizane ndi nthawi pokhapokha chitsanzocho chikafika kutentha komwe kumayikidwa.Mwanjira iyi, nthawi yomwe chitsanzocho chimasungidwa pa kutentha kokhazikika chidzasungidwa molondola ndi momwe zimayenderana ndi zomwe zimafunikira pogwiritsira ntchito.

Ma cyclers otentha nthawi zambiri amagwiritsa ntchito ma algorithms ovuta a masamu kuti awonetsetse kuti zitsanzo zitha kufika mwachangu kutentha malinga ndi pulogalamu yokhazikitsidwa kale.Kutengera kuchuluka kwa machitidwe omwe amachitira komanso makulidwe a mapulasitiki a PCR omwe amagwiritsidwa ntchito, algorithm imatha kuneneratu kutentha kwachitsanzo komanso nthawi yomwe ingatengere kuti ifike kutentha komwe kumayikidwa.Kudalira ma aligorivimu awa, pa Kutentha kapena kuzirala kwa chozungulira chotenthetsera, kutentha kwa chipika nthawi zambiri kumadutsa mtengo wokhazikitsidwa kudzera munjira yotchedwa thermal block overshoot kapena undershoot.Kukonzekera kotereku kumatsimikizira kuti chitsanzocho chimafika kutentha komwe kumayikidwa mwamsanga popanda kupitirira kapena kudzichepetsera.

Zoyeserera

Zinthu zomwe zingapangitse kuchulukira kwa woyendetsa matenthedwe amaphatikizanso mitengo yama ramp, masinthidwe a block block, ndi kuphatikiza kwa nsanja zodzichitira.

Kutentha ndi kuzizira kwa chozungulira chotenthetsera kumayimira liwiro lomwe limafikira kutentha komwe kumayikidwa.Kutentha kwachangu kukwera ndi kugwa, mofulumira PCR idzathamanga, zomwe zikutanthauza kuti mayesero ambiri akhoza kutsirizidwa mu nthawi yoperekedwa.Kuphatikiza apo, kuyesa kumatha kufulumizitsidwa pogwiritsa ntchito ma DNA polymerases othamanga.

Mapangidwe a module ya thermal cycler ndiwofunikiranso pakuyesa kwa PCR.Mwachitsanzo, ma modules osinthika amalola kusinthasintha kwa chiwerengero cha zitsanzo pa kuthamanga.Kuphatikiza apo, ma module otenthetsera okhala ndi ma module omwe amatha kuwongolera payekhapayekha ndi abwino kuyendetsa mapulogalamu osiyanasiyana a PCR nthawi imodzi pa cycle imodzi yotentha.

Kwa PCR yokhala ndi makina apamwamba kwambiri, mapulogalamu omwe amawongolera makina oyendetsera mapaipi ayenera kukhala osinthika komanso ogwirizana.Makina odzichitira okha ndi abwino pochita ma PCR apamwamba kwambiri chifukwa amatha kuyendetsedwa mosalekeza popanda kulowererapo pang'ono kwa anthu, potero kuchepetsa nthawi yofunikira pakukhazikitsa zoyeserera ndikuwonjezera kuchuluka kwa zomwe zimachitika munthawi yake.

Kudalirika, Kukhalitsa ndi Kutsimikizika Kwamtundu wa Ma Thermal Cyclers

Kuphatikiza pa magwiridwe antchito ndi kutulutsa, makina a PCR akuyeneranso kupirira kugwiritsidwa ntchito mobwerezabwereza, kupsinjika kwa chilengedwe, komanso kutumiza.Opanga ena atha kupereka lipoti la momwe chidacho chimachitira mayeso odalirika komanso olimba.Kuzindikira kwa zida za PCR kumaphatikizapo:

Kudalirika: Zida zamakina zimagwiritsidwa ntchito poyesa mayeso obwerezabwereza pazida zomwe zimagwiritsidwa ntchito pafupipafupi monga zivindikiro zotentha, zowongolera / zowonera, ndi ma module oyendetsa njinga zamoto.

Kupanikizika kozungulira: Zipinda zachilengedwe zitha kugwiritsidwa ntchito kutsanzira mikhalidwe yosiyanasiyana yoyesera, monga kutentha, chinyezi.

Kuyesa Kutumiza: Kuyesa kwamphamvu kwambiri komanso kugwedezeka kumatha kuchitidwa molingana ndi miyezo ya International Safety Shipping Association kuti zitsimikizire kuti chidacho chitha kufika pamalo osawonongeka.

Chitsimikizo ndi ntchito yosamalira makina a PCR

Ngakhale kudalirika kolimba komanso kuyesa kulimba, ma cyclers otenthetsera amakhala ndi zovuta zaukadaulo pa moyo wa chidacho.Kuti mukhale ndi mtendere wamumtima, chitsimikiziro, ntchito, ndi kukonza kwa wopanga ziyenera kuganiziridwa pogula chida.

Kusinthasintha kwa mautumiki monga kukonza pamalo/kubwerera ku fakitale, ntchito zowunikira kutali, ndi zida zosinthira pakukonza, ndi zina zotero, kuti achepetse kukhudzidwa kwa ntchito.

Kutalika kwa nthawi ya chitsimikizo, nthawi yosinthira ntchitoyo, kupezeka kwa chithandizo chaukadaulo, komanso luso la akatswiri othandizira.

Kuthekera kwa kukhazikitsa zida, kugwira ntchito, mgwirizano, ndi kutsimikizira kuti mukwaniritse zofunikira za labotale ndi zofananira.Ntchito zosamalira monga kutsimikizira kutentha, kuyesa, ndi kuwongolera zilipo kuti zitsimikizire kuti chidacho chimagwira ntchito moyenera ndi magawo ofananira.

Zogwirizana nazo: